Настройка фазового контраста
При микроскопии нативных препаратов (неокрашенных микроорганизмов, спермы), отличающихся от окружающей среды только по показателю преломления, изменения интенсивности света (амплитуды) не происходит, а изменяется только фаза прошедших световых волн. Поэтому глаз этих изменений заметить не может и наблюдаемые объекты выглядят малоконтрастными, прозрачными.
Для наблюдения таких объектов используют фазово-контрастную микроскопию, основанную на превращении невидимых фазовых изменений, вносимых объектом, в амплитудные, различимые глазом.
Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе и состоит из:
1) набора объективов со специальными фазовым пластинками на задней фокальной плоскости;
2) конденсора со встроенными вставками (конденсор Зернике). В нем установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов;
3) вспомогательного телескопа для настройки фазового контраста ( U-CT30-2).
Настройка фазового контраста заключается в следующем:
1. Установите освещение по Келеру;
2. Поверните револьверную головку, чтобы установить в световом потоке объектив для фазового контраста с тем же обозначением, что и на вставке.
2. Поместите образец и наведите приблизительный фокус.
3. Снимите один из окуляров и поменяйте его на Центровочный окуляр СТ-5.
4. Поверните внешнее (верхнее) кольцо СТ-5, фокусируя таким образом, чтобы светлое кольцо (прорези во вставкеа) (1) и темное кольцо (установленное в объективе) (2), были ясно видны в поле зрения.
5. Вращайте две центрующие ручки (3) до того, пока светлое и темное кольцо не совпадут концентрически.
6. Снимите СТ-5 и установите штатный окуляры, приступайте к наблюдениям.
Для увеличения контрастности изображения, поставьте зеленый фильтр (45 мм. диаметр) в основании микроскопа.
Центрирование фазовых колец объектива и вставки
Потренируйтесь настраивать фазовый контраст на симуляторе.
Благодаря применению этого способа микроскопии контраст живых неокрашенных микроорганизмов резко увеличивается и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст).
Фазово-контрастная микроскопия применяется также для анализа подвижности спермы, изучения клеточных культур, наблюдения действия различных вирусов на клетки и т. п. В этих случаях часто применяют инвертированные микроскопы, например Olympus CKX53, Olympus IX53/73/83. У таких микроскопов объективы расположены снизу, а конденсор - сверху.
